腾讯欢乐麻将官网|欢乐麻将50000豆礼包
學術堂首頁 | 文獻求助論文范文 | 論文題目 | 參考文獻 | 開題報告 | 論文格式 | 摘要提綱 | 論文致謝 | 論文查重 | 論文答辯 | 論文發表 | 期刊雜志 | 論文寫作 | 論文PPT
學術堂專業論文學習平臺您當前的位置:學術堂 > 醫學論文 > 臨床醫學論文 > 臨床診斷學論文

單臍動脈胎兒產前診斷中SNP-array芯片技術檢測運用

時間:2019-12-11 來源:中國優生與遺傳雜志 作者:費冬梅,歐陽魯平,黃紅 本文字數:5432字

  摘    要: 目的 探討染色體核型分析與單核苷酸多態性微陣列芯片技術(SingleNucleotidePolymorphismarray,SNP-array)在胎兒單臍動脈的遺傳學檢查中的應用價值。方法 回顧分析83例妊娠中晚期單臍動脈,行介入性產前診斷羊水或臍帶血標本的臨床資料,同時行染色體核型分析與染色體微陣列芯片檢查。染色體微陣列分析采Illumina Human Cyto SNP12微陣列芯片進行全基因組拷貝數變異(CopyNumberVariations,CNVs)檢測,結合查詢國際病理性CNVs數據庫(ClinGen、ClinVar、DECIPHER、OMIM)、正常人基因組變異數據庫(Database of Genomic Variants,DGV)以及PubMed文獻數據庫等對檢出的CNVs的致病性進行分析。結果 83例羊水、臍帶血胎兒單臍動脈的胎兒樣本中,染色體核型異常檢出3例,檢出率3.61%(3/83),SNP-array檢出9例異常,檢出率10.84%(9/83)。染色體異常中,3例羊水染色體核型異常主要為:1例染色體缺失,1例染色體易位,1例染色體嵌合。染色體正常,芯片異常的病例5例為臨床意義不明。結論 對超聲檢出胎兒單臍動脈的胎兒樣本,行SNP-array檢測有助于發現染色體核型分析無法檢出的染色體亞顯微結構異常,且SNP-array有利于提高對胎兒單臍動脈的遺傳學病因的診斷。

  關鍵詞:  單臍動脈; 產前診斷; 單核苷酸多態性微陣列芯片;

  Abstract: Objective:To evaluate the application value of chromosome karyotype analysis and single nucleotide polymorphism microarray technology in genetic examination of single umbilical artery fetuses. Method:Retrospective analysis of 83 cases of advanced umbilical artery in the third trimester of pregnancy,the clinical data of interventional prenatal diagnosis of amniotic fluid or cord blood samples,chromosomal karyotype analysis and chromosome microarray chip examination. Chromosomal microarray analysis uses Illumina Human Cyto SNP12 microarray chip for genome-wide copy number variation(CNVs)detection,combined with the query of international pathological CNVs database(ClinGen,ClinVar,DECIPHER,OMIM),normal human genomic variation database(Analysis of the pathogenicity of detected CNVs by Database of Genomic Variants(DGV)and PubMed literature database. Results:In the fetal samples of 83 cases of amniotic fluid and umbilical cord blood,the karyotype was detected in 3 cases,the detection rate was 3.61%(3/83),and the SNP-array detected 9 cases with abnormality,the detection rate was 10.84%(9/83). Among the chromosomal abnormalities,3 cases of amniotic fluid karyotype abnormalities were:1 case of chromosome deletion,1 case of chromosomal translocation,and 1 case of chromosome mosaic. 5 cases with normal chromosomes and abnormalities in the chip are clinically unclear. Conclusions:SNP-array detection of fetal samples of fetal single umbilical arteries can help to detect submicroscopic structural abnormalities that cannot be detected by karyotype analysis,and SNP-array is beneficial for improving the inheritance of fetal single umbilical arteries. Learning the cause of diagnosis.

  Keyword: Single umbilical artery; Prenatal diagnosis; Single Nueleotide Polymorphism array;

  臍帶是連接胎兒與胎盤的條索狀組織,正常臍帶內有兩條臍動脈和一條臍靜脈,當臍帶內僅有一條臍動脈時,稱為單臍動脈(single umbilical artery,SUA),SUA是最常見的臍帶畸形,其發生率為0.4%~5.04%[1,2]。是臨床上常見的胎兒先天異常情況之一,通常可合并其他結構組織畸形[3]。為探討妊娠早中晚期胎兒單臍動脈與胎兒染色體異常的關系及其對妊娠結局的影響。本文回顧性分析單純83例單臍動脈的胎兒產前診斷檢測結果,統計染色體核型結果與SNP-array芯片檢測結果,以探討SNP-array芯片技術檢測對胎兒單臍動脈胎兒產前診斷中的臨床意義,為臨床預后評估和遺傳咨詢提供理論依據。

  1、 資料與方法

  1.1、 資料來源回顧性分析

  2016年1月至2018年10月83例早中晚孕期就診于廣西壯族自治區婦幼保健院,行超聲篩查提示胎兒單臍動脈,介入性產前診斷,羊膜腔穿刺或臍帶血穿刺取樣活檢術。同時行染色體核型分析及SNP-array檢測,孕婦簽署知情同意書后,記錄隨訪妊娠結局。
 

單臍動脈胎兒產前診斷中SNP-array芯片技術檢測運用
 

  1.2、 儀器與方法

  1.2.1、 試劑:

  羊水培養基、秋水仙素、KCl、甲醇、冰乙酸、異丙醇、無水乙醇、胰酶、生理鹽水、NaOH、Cyto-12SNP基因芯片等。

  1.2.2、 儀器:

  應用GE Voluson E6/E10、TOSHIBA APLiO300/400/500,MindrayResona 70B,以及UGEO WS80A,PCR擴增儀(ABI,美國)、iScan(illumina,美國)、高速冷凍離心機(Thermo,美國),Lab-Aid 820核酸提取儀(廈門至善,中國)等。

  1.2.3、 超聲篩查單臍動脈測量方法:

  使用GE Voluson730型彩色多普勒超聲儀,經腹掃查,凸陣探頭,頻率設置為3.5~5.5 MHz。檢查方法:所有納入孕婦均取仰臥位,此后并對胎兒頭顱、顏面部位、頸項部、胸腹部內臟器官、四肢、脊柱及胎兒其它附屬物等行逐一的超聲掃描;同時對胎兒生長參數進行測定,包括雙頂徑(BPD)、頭圍(HC)、腹圍(AC)及股骨長徑(FL),用于分析胎兒是否存在先天異常情況,同時對胎兒數量和形態進行重點檢測觀察。若經超聲檢查發生異常表現,可行多切面、多角度的全方位掃查;并對胎兒腹部臍帶膀胱入口處進行有效掃查以明確臍動脈缺失側別情況。

  1.2.4、 介入性產前診斷:

  篩查過程中發現胎兒單臍動脈,均建議孕婦行介入性產前診斷。妊娠中期(16~22孕周)行羊膜腔穿刺術,妊娠晚期(22孕周后)行臍靜脈穿刺術。所有的穿刺樣本均分別行染色體核型分析和SNP-array檢測技術。

  1.2.5、羊水、臍帶血DNA提取:

  使用QIAamp DNA Blood Mini Kit(Qiagen,德國)試劑盒提取基因組DNA用SNP-array檢測;NanoDrop2000(Thermo Fisher scientific INC,美國)測定DNA濃度,保證DNA濃度大于50ng/L,A260/A280在1.8-2.0范圍。

  1.2.6 、羊水、臍帶血染色體核型制備及分析步驟:

  將0.1ml20μg/ml的秋水仙素注入培養完成的羊水或臍帶血細胞中,作用30min,胰酶消化2.5min,裝入15ml離心管內。經1500rpm離心15min,棄去上清液,低滲,預固定、以及3次固定后滴片。80℃烤箱內烘烤6h,采用G顯帶處理。高倍光學顯微鏡下觀察、分析。顯微鏡下計數20個核型,分析5個核型,遇到嵌合體加倍計數。

  1.2.7、 SNP-array檢測:

  應用美國Affymetrix Cyto Scan750K芯片平臺對樣本進行基因組拷貝數變異分析。實驗操作嚴格遵循Affymetrix公司提供的操作流程。采用Affymetrix 7G掃描儀掃描芯片,掃描信號圖經Affymetrix的Chas軟件分析、計算。

  1.2.8、 SNP-array檢測的判斷和評價:

  數據分析參照本實驗內部數據庫及DGV、DECIPHER、UCSC、OMIM等公共在線數據庫。

  1.3、 統計學分析:

  根據胎兒單臍動脈統計所有入選病例的染色體核型與SNP-array檢測結果,隨訪胎兒異常情況及妊娠結局。

  2、 結果

  2.1、 染色體核型分析:

  83例羊水、臍帶血胎兒單臍動脈的胎兒樣本中,染色體核型異常檢出3例,檢出率3.61%(3/83)。染色體異常中,3例羊水染色體核型異常主要為:1例染色體缺失,1例染色體易位,1例染色體嵌合。

  表1 SNP-array檢出的8例單臍動脈的胎兒中的CNVs結果
表1 SNP-array檢出的8例單臍動脈的胎兒中的CNVs結果

  2.2、 SNP-array檢測結果:

  83例羊水、臍帶血胎兒單臍動脈的胎兒樣本中,SNP-array檢出9例異常,檢出率10.84%(9/83)。芯片異常主要為2例為致病性變異,6例為臨床意義不明拷貝數變異。

  2.3、 基因芯片與核型分析對羊水標本檢出異常情況見表1。

  3、 討論

  單臍動脈是否是產前染色體檢查的指征,一直困擾著產科醫生,部分學者認為SUA的孕婦無需行胎兒染色體檢查,亦有學者認為SUA是染色體異常的高危因素。對于胎兒較珍貴,孕婦絲毫無法承擔新生兒異常的患者來說,胎兒染色體檢查尤為必要。傳統的染色體檢查為介入性穿刺,包括羊水穿刺和臍血穿刺。雖然介入性穿刺對于產前診斷來說準確性高,為臨床診斷的金標準,但介入性穿刺有造成孕婦出血、流產及傷及胎兒等風險[4],常給孕婦及家屬帶來心理和經濟上的雙重負擔,尤其對于一些胎兒較珍貴的孕婦來說尤為如此。因此,如何安全有效并準確的對SUA進行產前篩查是我們需要關注的問題之一。

  單核苷酸多態性芯片(SNP-array)技術對非整倍體和不平衡性染色體重排的檢出效率和傳統核型分析方法相近,并具有更高的分辨率和敏感性,且SNP還能發現額外的,各種臨床意義的基因組CNV,尤其是對于產前超聲檢出發現胎兒結構異常者,SNP是目前有效的遺傳學診斷方法[5,6]。由于該基因芯片檢測不需要進行細胞培養,因此其適用于細胞培養較難成功的檢測樣本,或者有明顯癥狀但常規核型分析未檢出異常的樣本。目前關于染色體微陣列技術在超聲異常胎兒中應用的研究越來越多,極大的提高了超聲異常胎兒中檢測染色體微缺失或微重復綜合征的水平[7]。本文研究顯示,單純胎兒單臍動脈行產前診斷技術檢查時,染色體核型異常檢出率與芯片檢測異常檢出率上存在較大差異。

  83例羊水、臍帶血胎兒單臍動脈的胎兒樣本中,染色體核型異常檢出3例,檢出率3.61%(3/83),有研究表明雖然SUA的胎兒合并染色體異常的病例不多,但其存在仍增加了染色體異常的風險[8]。本研究單核苷酸多態性芯片檢測技術共計檢出2例致病性CNVs病例,以及6例臨床意義不明的CNVs病例。本研究中病例1為11號染色體q24.1q25區域,該片段缺失涉及Jacobsen綜合征區域,該綜合征的臨床表現包括發育遲緩、認知損害、智力障礙、學習困難、特殊面容、行為問題等,其中85%的Jacobsen綜合征患者為新發缺失,另外15%的患者缺失由于雙親染色體易位導致,該缺失片段目前包含大量已知的OMIM致病基因;同時還存在低比例的X染色體嵌合缺失,嵌合比例約為5-15%,為致病性染色體拷貝數異常。X染色體的缺失可導致特納綜合征。該病因為性染色體X呈單體性所致,發病率約1/2500,99%的病例發生流產。部分出生的特納綜合癥患者通常表現為身材矮小和卵巢衰竭,在產前胎兒常表現為頭頸部囊性淋巴管瘤、主動脈狹窄和左心發良不全、股骨短、嚴重的皮下水腫等臨床癥狀。由于羊水標本培養過程易導致染色體丟失,或者制片過程中,異常核型更易漏檢出,導致染色體未能檢出,尤其是低比例嵌合這種情況。病例2為12號染色體三體嵌合,染色體異常是早期自然流產的最常見病因,尤其是孕周不足6-8w早期流產中,染色體異常發生率可達到50-60%,染色體異常的發生率隨母親年齡增高而增加。12號染色體三體嵌合是較為罕見的致病性染色體拷貝數異常。另外6例檢測為臨床意義不明,其中病例3涉及7號染色體p21.3p21.2區域存在約3.8M的片段缺失;病例5檢測到15號染色體q24.2區域存在約0.4Mb大小的片段缺失,該區域包含1個已知致病的OMIM基因:SIN3A基因可導致Witteveen-Kolk綜合征,遺傳方式為常染色體顯性遺傳。該片段缺失在正常人群數據庫DGV中有三例報道;病例8為21q21.1q21.2約2.6Mb缺失,病例4檢出4號染色體長臂q13.1q13.2區域2.77Mb片段重復,該片段包含一個致病基因GNRHR,該基因與低促性腺激素功能減退癥有關,但無文獻報道該基因的重復會導致疾病的發生;而病例6為7號染色體p15.3p14.2區域存在約11Mb雜合性缺失區域(AOH),病例7則是12號染色體q21.1q23.1區域約25Mb純合區域(AOH),對于檢出的這兩例染色體純合性區域(AOH),大多數臨床意義不明,但需警惕該區域內印記基因、隱性遺傳基因的致病風險。當出現與該區域內印記基因、隱性遺傳基因的相關的臨床表現時,需對相應的基因進一步有針對性的檢測。

  SNP技術則對致病性CNV檢出有明顯優勢,但仍存不足,在染色體平衡易位、染色體倒位的檢測中具有不可替代的作用,以及對大量的微小片段是否致病性的解釋所困惱。單臍動脈作為產前檢測的重要指征,行常規染色體核型分析并行SNP分析,以獲得更多的遺傳學信息,為單臍動脈預后評估及遺傳咨詢指提供更優的臨床決策。

  參考文獻

  [1] Malova J,Bohmer D,Luha J,et al. Single umbilical artery and reproduction losses in Slovak population:relation to karyotype and fetal anomalies[J].Bratisl Lek Listy,2018,119(6):330-334.
  [2] Khalil MI,Sagr ER,Elrifaei RM,et al. Outcomes of an isolated single umbilical artery in singleton pregnancy:a large study from the Middle East and Gulf region[J].Eur J ObstetGynecol Rep Biology,2013,171(2):277-280.
  [3]鄧春艷,王曉東,余海燕.胎兒單臍動脈的研究進展[J].中華婦幼臨床醫學雜志(電子版),2015,11(6):786-788.
  [4]高勁松,劉俊濤.介入性產前診斷適應證和禁忌證及應用[J].中國實用婦科與產科雜志,2015,31(9):825-828.
  [5] Shaffer LG,Dabell MP,et al. Experience with microarray based comparative genomic hybridization forprental diagnosis in over5000pregnancies[J].Prenat Diagn,2012,32:976-985.
  [6] ShafferLG,et al. Detection rates of clinically significant genomic alteration by microarray analysis forspecific anomaliesdetected by ultrasound[J].Prenat Diagn,2012,32:986-995.
  [7]李茹,鄧瓊,廖燦,等.染色體微陣列技術在超聲異常胎兒預后評估中的應用[J].實用婦產科雜志,2018,34(11):803-806.
  [8]宮潤琦,趙穎.胎兒孤立性單臍動脈與染色體異常的關系研究[J].中國實用婦科與產科雜志,2018,34(11):1258-1260.

    論文來源參考:費冬梅,歐陽魯平,黃紅倩,蘇景玉,劉天盛,覃旺尚,邱慶民,孫惟佳.83例單純單臍動脈胎兒的遺傳學因素探討[J].中國優生與遺傳雜志,2019,27(11):1381-1383.
      相關內容推薦
    相近分類:
    • 成都網絡警察報警平臺
    • 公共信息安全網絡監察
    • 經營性網站備案信息
    • 不良信息舉報中心
    • 中國文明網傳播文明
    • 學術堂_誠信網站
    腾讯欢乐麻将官网 高频彩票开奖结果 北京时时彩赛车违法吗 24小时极速11选5走势图 广西快乐10分分析软件 北京pk10冠军5码怎么玩 牛彩网p3开机号 海南环岛赛 重庆快乐十分最开奖 金沙棋牌9527 广东象棋网站